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时间:2020-07-04 20:14  编辑:东安房管局

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菌种室无菌操作规程

一、目的

保证无菌室的清洁卫生及保证生产,为生产提供合格无杂菌种,特制订该规程

二、适用范围

本作业指导书适用于实验室无菌室的操作管理。

三、职责

实验室负责人负责本作业指导书的监督捡查。

四、作业要求

1.环境卫生

1.1、进入无菌室必须换鞋、工作服,然后用桶里面的消毒液洗手。如果是进行接种必须换防护措施严格的工作服,帽子、口罩。

1.2、无菌室每日均通无菌空气操作时关闭,并依使用频繁与否不定期用新洁尔灭溶液或84等消毒液擦地、墙、桌面、灯。每周三、周日彻底的打扫、擦拭墙地面,不留任何死角,清洁消毒的顺序是从上而下,从左到右,由里而外。打扫完之后填写《菌种室消毒记录》。

1.3、每周各房间做一次沉降菌试验,具体操作是:在紫外灯关闭后半小时后进入无菌室立即将营养琼脂培养平皿打开,在空气中放置30min(每个房间放置一个)然后盖好皿盖放于37℃培养24h,然后计数,填写《菌种室落菌情况记录》,如果平板上的菌落数超过3个必须进行消毒灭菌。待消毒灭菌之后,再做平板落菌。如果此时平板的菌落数仍然超过三个,此时必须进行熏蒸灭菌。

1.4.无菌室平时应保持整洁,无关杂物严禁放入尽可能的少在无菌室走动。

1.5.使用完无菌室之后关排风装置,开启臭氧发生器30min。待下次使用时提前打开排风装置,方可进入操作。如遇染菌等异常情况下,要对无菌室进行全面的卫生清理,并进行熏蒸(一般不建议采用,除非特殊情况)。

1.5.1、甲醛熏蒸方法:将房间面积计算出,然后按照按照甲醛(40%)5ml/m3、高锰酸钾2.5g/m3的用量。不同情况下,用量有所不同,但比例均为2:1。

1.5.2、将高锰酸钾放置于耐高温、耐腐蚀的陶瓷或玻璃器皿中,然后将甲醛倒入器皿内快速撤离,关好房门。

1.5.3、将空间密闭12h后打开无菌风通风换气,熏蒸后若甲醛味浓烈,可在使用前用一半甲醛量的氨水中和。

1.6.使用前后半小时用紫外灯对无菌间、缓冲间照射消毒。

1.7.接种前将所需要带入无菌室内的所有物品需提前放入缓冲间进行辐照灭菌后,方可带入。

1.8.操作用无菌服、口罩不得带出无菌室(灭菌除外)。

2.具体操作

2.1.进入无菌室人员,进行菌种斜面转接时:实验开始前半小时将工作台以及空间的紫外灯打开。等杀菌时间完毕方可进入无菌室,进入时换鞋、戴口罩、无菌服。然后用准备好的消毒液洗手,通过缓冲间进入接种间。进入的整个过程均要随手关门且需轻关轻开。

2.2操作时,用75%酒精擦拭工作台面、双手及手臂,工具要在酒精灯火燃灼烧灭菌,待工具灼烧灭菌后方可进行实质性的操作,操作的整个过程均不要远离酒精灯火燃。

2.3.液体种子转接时,此过程需两人完成主操作者负责将菌液用无菌吸管吸出,副操作者负责拿瓶子揭纱布,副操作者需注意整个过程的动作必须是在酒精灯火焰旁完成。

2.3.1具体如下:副操作者在火焰旁将瓶子上的纱布打开,主操者迅速吸取所要数量的菌液注入空白培养基中,之后副操作者迅速盖好纱布、封好瓶口,至此整个过程完成。

2.4.每次操作完成之后将废弃物带出无菌室,并将所使用的无菌室清理干净,然后用75%的酒精、5%的苯酚等消毒液喷雾消毒。

2.4将使用过的接种铲及吸管等物品清洗干净,并灭菌以备下次使用。

3、其它措施

3.1.对于摇床间内培养过程出现的异常瓶需立即取下,并在高压蒸汽灭菌锅内灭菌洗刷干净,用酸或碱液浸泡后,单独存放备用。

3.2.对于常用的封口纱布、塞子有污染物的及时清理干净,并两周进行一次彻底灭菌。

3.3.实验用的吸管、接种铲、接种针等工具物品,灭菌后放在80℃的烘箱内,用时从中拿取。

3.4.每天班后对工作的大环境进行彻底的打扫,然后喷洒消毒液,各类消毒液(84、新洁尔灭、石碳酸等)交替使用。

附:无菌室进出程序

实线为进入程序

虚线代表出室程序

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